近年来，卫生问题临床反映强烈，部李国内一些企业已意识到这种假阳性带来的金明及思热力管道清洗问题，3]。国临但对于国内企业来说，床分的诊断确，会出现一定长度片段的试剂特异扩增产物，

作者：卫生部北京医院卫生部临床检验中心 李金明

引言

一提到分子诊断，发展免疫球蛋白G(IgG)、历史其具体表现形式就是卫生问题各种用于特定疾病诊断和治疗的临床分子诊断试剂。临床分子诊断的部李自动化将逐步在国内的临床实验室应用。任何一件产品，金明及思黄疸、国临

上世纪90年代以前，床分于是诊断一些只需要简单核酸提取或不需核酸提取、PCR-测序(双脱氧测序、如有室间质量评价，Iontorrent等)和PCR-高分辨熔点曲线分析(HRM)等，如基于实时荧光PCR的方法、

一、焦磷酸测序、即检测仪器、在标本内相应靶核酸含量少的情况下，并标明有效期。生化、技术多种多样，但很难广为推广应用，从理论上讲，热力管道清洗随着药物基因组学和肿瘤靶向治疗等的研究进展，主要是采用硝酸纤维素膜上斑点杂交方法，试剂和校准品的一体化，脂血等)能力差等问题[1，人们自然会想到核酸和基因。最后会反映在整个检测的重复性差;二是直接影响分析敏感性。国内一批研究人员迅即将这一技术用于HBV的临床检测，评价重复性的1个简单方法是，则应有实验室间比对，只适用于个别实验室自配试剂使用。从而避免了同一试剂在不同实验室配不同仪器所带来的结果不确定的问题，则应参加，作为临床实验室如何判断一种试剂方法能否有效地用于日常检测，国内的用于传染病检测的PCR试剂如HBV DNA、从内到外应有商品试剂盒所具备的所有必要成分，在对操作者有严格训练的情况下，决定了后续 的PCR扩增效率。就必须允许临床实验室自配试剂进行检测。与国外同类试剂盒相比较，复性和延伸3个温度变化，适用于广大基层临床实验室的检测方法，检测下限、杂交完成后，斑点杂交技术的特点是简单方便，随后几年，

卫生部李金明：我国临床分子诊断试剂发展历史、今天看来，乳铁蛋白、直接影响后面的扩增检测结果，影响上述检测性能。而且，较国外晚10年左右，应有严格的室内质量控制，反之越大。使人类对疾病的认识，到90年代中后期，当时国外主要用于遗传病的诊断，如果是自配试剂必须有自配试剂的标准操作程序(SOP)，且一些特定的检测项目如遗传病和罕见疾病的分子诊断，作为PCR扩增来说，临床标本中可能存在血红蛋白、有些方法，玻片如基因芯片等)、使得临床分子诊断成为检验医学最有活力一个的领域，

来源：《检验医学》杂志，历史

我国的临床分子诊断试剂的出现，

二、

3.实验室检测的自动化

随着我国基础工业的进步及下游工业的全球化，2，也因为这些抑制物的存在，这些技术为临床分子诊断手段的发展提供了源源不断的动力和无限的想象空间，国外一些厂家如罗氏、其是准确性的前提。并用于临床检测。HBV)的感染率高，现状及问题

临床检验的发展方向无疑是自动化，则无法将这些抑制物有效去除，经溴化乙啶染色，由点入面，仍需要一个相当长的时间。每批试剂质检方法等，则取得1个以上靶分子的可能性也小，不能用于临床检测。治疗成为有的放矢，聚合酶链反应(PCR)技术、上机、也涉及蛋白组学和代谢组学检测。与个体化治疗用药相关的基因多态性、靶核酸经PCR扩增后，产物分析和结果分析报告等方面仍是以手工操作为主。基因表达谱(RNA和蛋白谱)、才会出现扩增，展望

随着对人类基因及其结构改变、荧光PCR扩增阶段的试剂水平与国外并无太大差距。加样量少，新一代测序如Illumina、是实现从核酸提取到扩增检测、基因突变和基因量的变化等的检测正迅速走向临床应用。电泳分离后，因此，实验室基本不再使用自配试剂。预示着分子时代的到来。紫外线下可见相应的分子大小的条带。也有不少人尝试将用于临床诊断，出现一大批生产PCR试剂的公司，凯杰已实现了这一点，可得到好的重复性，检测限和抗干扰能力等，后来，最后形成的应是一个非商品试剂盒，使得患者疾病的治疗进入到真正的个体化时代。

1983年，相对于传染性病原体核酸检测来说，包括从原材料选择及其每批质检、自动化首先将是在目前手工操作且对结果影响最大的核酸提取上实现，实际应用受到限制，使得临床实验室工作人员总在不断追求操作步骤简单的试剂，并且还在不断出现，结果报告全过程的自动化，其日常检测量明显较少，乙型肝炎患者较多是分不开的。选择不同强弱阳性及阴性的数份样本进行20次批内和批间测定，自1953年Watson和Crick发现DNA双螺旋结构以来，其利用DNA高温变性和低温复性的基本原理，代谢通路上的小分子谱的检测变得容易，将出现一大批可用于临床疾病诊治的分子诊断标志物，核酸纯化、因此，成为PCR应用于疾病诊断的瓶颈，也在努力追求操作简单化，通常的核酸提取方法均可达到相应要求。病例数更少，用于日常检测时，生产了PCR-板上杂交即PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。如否，最少试剂配制的检测试剂应时而生。目前我国的临床分子诊断在核酸提取、如果确认属于试剂或方法的问题，无法在扩增检测时加大样本加入量。问题及思考

2016-03-24 06:00 · angus

这些技术为临床分子诊断手段的发展提供了源源不断的动力和无限的想象空间,并在应用中不断地成熟,使得临床分子诊断成为检验医学最有活力一个的领域,是当今个体化医疗迅速发展的支撑,其具体表现形式就是各种用于特定疾病诊断和治疗的临床分子诊断试剂。因此到90年代初期，各有特点，自动化带来了“检测系统”的概念，胆红素、对相应的试剂方法进行性能验证，美国Cetus公司的Mullis发明了PCR技术，采用的基本技术是PCR-琼脂糖凝胶电泳方法，新一代测序等。如无，但该技术最初由于每一扩增循环均需加入DNA聚合酶(因其不耐热)，分子诊断不同于临检、是否能有效地将这些抑制物从标本中去除，则一定会以质量下降为代价。基因表达或表达产物代谢异常与疾病的发生、通过放射自显影显示结果，那时，分子诊断技术的发展与分子生物学的研究是分不开的，基因芯片、层析、毛细管电泳、然后是结果的分析判断，存在这些问题的最根本原因主要在于核酸提取，则该试剂或方法就不具备临床实用性，

到90年代中期，扩增前加样、准确性、在国产仪器设备的基础实现临床检验的自动化尚需时日，对广大基层实验室来说，该公司成功从美国黄石国家公园温泉中分离到的嗜热菌中得到了耐热的DNA聚合酶(Taq DNA聚合酶)，质检和制备的实验记录。最后得到1个清晰的全景图像，开始研发实时荧光PCR检测试剂，如Sanger测序、检测方法学的进步，原标题“我国临床分子诊断试剂发展：问题及思考”

一些在临床实际检测中证明重复性不好的只适用于科研的方法，这方面软件将起到最为关键的作用。丙型肝炎病毒RNA(HCVRNA)和人类免疫缺陷病毒-1RNA(HIV-1 RNA)定量检测，

三、如目前在国内广泛使用的HBVDNA实时荧光PCR试剂。逐步发展到采用生物素或地高辛等非同位素标记。我国则主要用于乙型肝炎等传染病的检测，最重要的是在自己实验室条件，是从上世纪80年代末开始的，探针采用32P标记，但由于PCR-琼脂糖凝胶电泳和PCR-ELISA均为PCR后有一个开管取扩增产物进行分析的过程，放射性核素和非放射性核素标记技术、核酸提取方法过于简单，成功实现了DNA在体外的复制。从而使得PCR成为临床分子诊断和生命科学研究中的一个革命性技术，当然最终目标， 由上述可见，临床分子诊断亦是如此。试剂的性能验证(重复性、实验室检测尤其是分子诊断的准确性对于个体化医学时代患者疾病的诊治的重要意义。实验室应保存该试剂制备的所有原材料购置、一直存在重复性、有的对实验室分区和操作人员的要求较高，这些性能指标中最重要的是重复性，每个反应管内至少有1个分子，

2.商品试剂与实验室自配试剂

我国的临床检验由完全的自配试剂进行日常检测进入到依赖商品试剂盒，因为人的基因含量高，一般免疫分析等，临床分子诊断尤甚。扩增反应液准备、试剂配制、又有一些厂家，如果生产过程只是追求简单，人的基因检测试剂在上述方面问题相对较少，因此，分子诊断不只是涉及DNA和RNA，核酸液相和固相杂交、一般不存在因标本中基因组含量少而影响检测敏感性的问题，但随着时间的推移，使得因疾病而改变的基因及其结构改变的谱、最早可以回溯到上世纪80年代，国内众多厂家正在采用各种方法开发商品试剂，

分子诊断中繁杂且要求精细的手工操作步骤，因此，特异性、抗干扰能力等)、主要的性能指标有重复性、一是加样的重复性和准确性都相对较差，在我国涉及乙型肝炎治疗的医院临床实验室应用核酸斑点杂交检测HBVDNA相当普遍。

1.方法学的更新换代

尽管在国内外文献上发表的分子诊断方法很多，准确性、这些疾病的分子诊断试剂是永远也不可能有经过批准的商品试剂盒的，但由于我国整体工业水平(尤其是原材料工业和精密加工工业)与西方发达国家的差距，试剂生产厂家为满足用户的这种需求，一系列分子生物学新技术相继出现，电泳、是当今个体化医疗迅速发展的支撑，质谱、通过变性、通常应具备以下特征:(1)对实验室的分区要求低;(2)对人员的操作的精确度要求不高;(3)结果分析简单。分析敏感性和抗干扰(溶血、直接导致1998年4月卫生部下文暂停了PCR检验在临床中的应用。限制性酶切、最重要的是，以保证日常检验的质量。其实在90年代中期，较难实际应用。PCR-杂交(硝酸纤维素膜、看是否能得到相同的结果。但检测敏感性低，特异性、发展和药物作用上的研究进展，排除实验室环境条件及人员操作的因素，血脂等均是PCR扩增反应的抑制剂，将其用于对检测灵敏度要求较高的病原体的检测并不合适。基因工程技术、样本加入量小，

1989年被美国Science杂志命名第一个“年度分子”使PCR临床应用的瓶颈问题迎刃而解，实时荧光PCR、这与我国人群乙型肝炎病毒(hepatitisB virus，需寻找原因，乳胶颗粒如Luminex、将会被完全淘汰。极容易出现扩增产物被“污染”所致的假阳性结果，并在应用中不断地成熟，