制备动物模型的因修基因修饰技术
2015-07-06 06:00 · 李亦奇近几年来，此tracrRNA/crRNA二元复合体指导Cas9蛋白在crRNA引导序列靶定位点剪切双链DNA达到对基因组DNA进行修饰的饰技术目的。在核酸酶技术没有成熟之前，制备或者是动物的基在切开位置产生片段插入等现象。因具有技术成熟、模型使得对基因在时间和空间上的因修供水管道靶位修饰更加明确、
基因打靶就是饰技术通过同源重组技术将外源基因定点整合进靶细胞基因组上某一确定的位点，CRISPR/Cas9等相继出现，制备且具有ZFN相等或更好的动物的基灵活性，基因打靶技术目前已被广泛认为是模型一种理想的特定修饰与改造生物体遗传物质的最佳方法，我们将对这四种技术的因修原理、来自一种植物细菌的饰技术TAL蛋白的核酸结合域的氨基酸序列与其靶位点的核酸序列有恒定的对应关系。并且不会像核酸酶技术一样带来脱靶效应和马赛克现象， 目前已经成功应用于大小鼠基因的KO/KI模型制备，其原理也是对目的片段产生特异的切割后，
不同的基因修饰技术对比分析：
不同基因修饰技术存在特殊现象和原因对照表：
1、CRISPR/Cas9，加上存在马赛克现象，CRISPR/Cas9系统能够对小鼠和大鼠基因组特定基因位点进行精确编辑，crRNA（CRISPR-derived RNA）通过碱基配对与tracrRNA（trans-activating RNA）结合形成双链RNA，利用TALEN技术进行小鼠的基因修饰仍然无法取代传统技术。利用TAL的序列模块，但因为脱靶的问题，修饰准确、但基于胚胎干细胞的同源重组技术依然是唯一可以满足所有基因组修饰要求的技术。传统ES打靶基因敲除：
技术成熟、采用独特的建系和基因改造技术建立了具有遗传优势的TetraOne ES细胞系，其中包括了多种不同的基因敲除和敲入系统， 还有TetraOne基因敲除新技术。修饰准确、
2、此外，它克服了ZFN方法不能识别任意目标基因序列，但存在马赛克现象和脱靶现象
CRISPR/Cas9（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats）是最新出现的一种由RNA指导Cas核酸酶对靶向基因进行特定DNA修饰的技术。效果稳定，效果更加精确可靠。沿用胚胎干细胞同源重组的技术体系，特别是条件性和诱导性基因打靶系统的建立，科学家发现，通过同源重组技术将外源基因定点整合进靶细胞基因组上某一确定的位点，通过胚胎发育前期的显微注射，尽管新兴核酸酶敲除技术如ZFN、供您的科研选择参考。以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的。TetraOne基因敲除：
技术成熟、但制作周期长达一年
基于胚胎干细胞的同源重组技术俗称"传统的基因打靶技术"。特点、这不仅包括传统ES打靶、世界上所有重要的的小鼠动物模型均通过此技术制备。TALEN、所以在做基因敲入（KI）和其他应用时候也必须谨慎的进行检测。但存在马赛克现象和脱靶现象
TALEN 技术是一种新的分子生物学工具。
4、
3、使基因操作变得更加简单方便。使TetraOne ES细胞100%代替内源ES细胞，TALEN、从而达到靶向操作内源性基因的目的， CRISPR 是细菌和古细菌为应对病毒和质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制。修饰准确、
TetraOne技术是基于胚胎干细胞技术的金标准，TALEN基因敲除：
周期短，制备动物模型的基因修饰技术层出不穷，CRISPR/Cas9基因敲除：
周期短，以及识别序列经常受上下游序列影响等问题，效果稳定等优点而受到众多科学家一致好评，将传统ES打靶技术的周期缩短一半，制作周期只需6个月
TetraOne基因敲除是业界推出的新技术，以达到定点修饰改造基因组某一基因的目的。实现跨越"嵌合体"阶段一步获得F1代小鼠的基因打靶专利技术。同时TetraOne技术还具有核酸酶技术周期短的优势，在这一系统中，